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绿脓杆菌分离与鉴定
发布时间:2013-06-24   作者:种禽动保中心 荣国明   阅读次数:8956

 

    绿脓杆菌又称铜绿色假单胞菌,是一种致病力较低但抗药性强的杆菌。广泛存在于自然界,是伤口感染较常见的一种细菌,一般能引起化脓性病变。感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色,故名绿脓杆菌。绿脓杆菌属假单胞菌属,广泛分布于自然界及正常人皮肤肠道呼吸道,是临床上较常见的条件致病菌之一。临床上雏鸡感染绿脓杆菌可引起高度的发病率和死亡率。

中文学名:绿脓杆菌                   纲:γ-变形菌纲

拉丁学名:Pseudomonas aeruginosa  目:假单胞菌目

别称:铜绿假单胞菌                   科:假单胞菌科

界:细菌界                           属:假单胞菌属

门:变形菌门                         种:绿脓杆菌

     

     1假单胞菌的细菌形态          2为显微镜下的绿脓杆菌形态

    一、病料采集部位

   创伤脓汁、脓肿、败血症死亡鸡的血液或脏器,死胚,卵黄囊内容物,污染的注射器和针头等。

   二、检验方法

   1.染色镜检:革兰氏染色镜检可见到散在的无芽胞、无荚膜的革兰氏染色阴性杆菌,待人工培养后制成湿片(或悬滴标本片),在暗视野显微镜下,可见到呈直线运动的细菌,本菌有一端是单鞭毛,在形态上与类似的杆菌难以区分。

   2.分离培养:取病理接种在普通琼脂或血液琼脂平板上,置37温箱中培养24小时,可见到光滑、湿润、微隆起、边缘整齐或波状的中等大小菌落,能产生水溶性的绿色素和荧光素,并扩散到培养基(碱性)中,显绿色;在酸性培养基中呈棕粉色菌落,数日后,菌落表面有金属光泽。在血液培养基上呈完全溶血,在菌落周围有透明的溶血环。使肉汤混浊呈绿色,表面有菌膜。土豆培养基上呈绿棕色菌苔,培养基内为暗绿色。穿刺接种三糖铁培养基,培养基底部和斜面皆成红色,斜面上菌苔呈棕黑色并有金属光泽。

   3.生化试验:在培养基中绿脓杆菌产生下面主要代谢产物,常作为鉴定本菌的依据。

   3.1溶血素:在绿脓杆菌的陈旧培养物中可产生一种能使狗、兔、绵羊及人血细胞溶解的溶血素。

   3.2色素:绿脓杆菌产生两种水溶性色素,即绿脓素和荧光素。在假单胞菌属中,只有绿脓杆菌产生绿脓素。荧光素则在本属中有很多菌株能产生。绿脓素可溶于水或氯仿中,它的产生可被5%硝酸钾、8%氯酸钾、5%氯化钠和低于抑菌浓度的多种消毒剂所抑制,由于绿脓素的氧化,在陈旧的培养物中有时可见到黑色素,荧光素是一种黄绿色荧光色素。溶于水而不溶于氯仿,在陈旧的培养物中,荧光素被氧化变成黄棕色的脓黄质。

   3.3生化试验特点:绿脓杆菌发酵糖类的能力不强。发酵葡萄糖产酸不产气,糖代谢属氧化型,分解缓慢,其他糖类一般均不分解,不产生靛基质,能形成硫化氢,硝酸盐还原为阳性(时间过长,如超过4~5天常呈阴性,因亚硝酸盐进一步还原成氮),液化明胶。绿脓杆菌常见生化反应试验结果如下表:

1绿脓杆菌生化反应试验结果

生化试验  葡萄糖  代谢型  乳糖  麦芽糖  甘露醇  蔗糖靛基质

  结果           氧化                       

生化试验  靛基质  硝酸盐  明胶  硫化氢  绿脓素  荧光素

  结果           还原   液化               

                                                           

2绿脓杆菌与假单胞菌属的区别

   试验

菌种

 绿脓素

氧化酶

42℃ 生长

硝酸盐还原

SS

生长

麦芽糖氧化

绿脓杆菌

+(-)

荧光杆菌

V

Ps.putida

V

Ps.cepcia

/

嗜麦芽糖杆菌

/(+)

类鼻疽杆菌

注:“+”为阳性及生长;“-”为阴性及不生长;“(-)”,“(+)”为少数菌株;“V”为不定。

4.病原动物回归试验  

    取本菌24小时肉汤培养物0.2毫升,接种到一日龄雏鸡颈部皮下,雏鸡在1~2天内死亡。病变可见肝脏黄染,有点状出血,注射部位皮下水肿,出血和有胶冻样的渗出物。

 
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